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大腸菌群的檢測方法常見問題解答

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常用標準



(1) GB/T 4789.3-2003 食品衛生微生物學檢驗 大腸菌群測定

(2) GB 4789.3-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數

(3) GB 4789.28-2013 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求

(4) GB 4789.1-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 總則

(5) GB 4789.41-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 腸桿科檢驗

(6) GB/T 27405-2008 實驗室質量控制規范 食品微生物檢測

(7) GB/T 16294-2010 醫藥工業潔凈室(區) 沉降菌的測試方法

 

 

常見問題及解答

 



1:食品中大腸菌群的檢測有兩個標準三種方法,該如何選擇呢?

A:依據產品標準的項目單位

1.1、若單位為CFU/g,則選擇GB 4789.3-2016第二法(平板計數法)

1.2、若單位為MPN/g,則選擇GB 4789.3-2016第一法(MPN計數法)

1.3、若單位為MPN/100g,則選擇GB/T 4789.3-2003

2MPN3個適宜的連續稀釋度該怎樣選擇?

A:依據產品標準的項目標準值

2.1、若標準值為<3.0MPN/g,則選擇0.1g0.01g0.001g三個稀釋度。

2.2、若標準值為≤30MPN/100g,則選擇1g0.1g0.01g三個稀釋度。

 

 

樣品采集

 


 

 

怎樣采樣,才能使樣品具有代表性?

這里將樣品分為兩類:預包裝食品和散裝食品或現場制作食品

1)、對于預包裝食品

① 應采集相同批次、獨立包裝、適量件數的食品樣品,每件樣品的采樣量應滿足微生物項目檢驗的要求。

② 獨立包裝小于、等于1000g 的固態食品或小于、等于1000mL 的液態食品,取相同批次的包裝。

③ 獨立包裝大于1000mL 的液態食品,應在采樣前搖動或用無菌棒攪拌液體,使其達到均質后采集適量樣品,放入同一個無菌采樣容器內作為一件食品樣品;大于1000g 的固態食品,應用無菌采樣器從同一包裝的不同部位分別采取適量樣品,放入同一個無菌采樣容器內作為一件食品樣品。

2)、對于散裝食品或現場制作食品

用無菌采樣工具從 n 個不同部位現場采集樣品,放入 n 個無菌采樣容器內作為 n 件食品樣品。每件樣品的采樣量應滿足微生物項目檢驗單位的要求。

 

 

培養基制備過程容易出現問題解答

 

 

1、異常現象一:培養基不凝固

原因分析:

①制備過程中過度加熱;

②低pH造成培養基酸解;

③稱量不正確;

④瓊脂未完全溶解;

⑤培養基成分未充分混勻。

2、異常現象二:pH不正確

原因分析:

①制備過程中過度加熱;

②水質不佳;

③外部化學物質污染;

④測定pH時溫度不正確;

pH計未正確校準;

⑥脫水培養基質量差。

3、異常現象三:顏色異常

原因分析:

①制備過程中過度加熱;

②水質不佳;

pH不正確;

④外來污染;

⑤脫水培養基質量差。

4、異常現象四:產生沉淀

原因分析:

①制備過程中過度加熱;

②水質不佳;

③脫水培養基質量差;

pH計未正確控制。

5、異常現象五:培養基出現抑制/低的生長率

原因分析:

①制備過程中過度加熱;

②脫水培養基質量差;

③水質不佳;

④使用成分不正確,如:成分稱量不準,添加劑濃度不正確;

⑤制備容器或水中的有毒殘留物。

6、異常現象六:選擇性差

原因分析:

①制備過程中過度加熱;

②脫水培養基質量差;

③配方使用不對;

④添加成分的加入不正確,例如加入添加成分時培養基過熱或添加濃度錯誤;

⑤添加劑污染。

7、異常現象七:污染

原因分析:

①不適當的滅菌;

②無菌操作技術存在問題;

③添加劑污染。



 

實驗過程

 


 

 

12016版平板法VRBA傾注完,待瓊脂凝固后為什么需要加3-4mL的覆蓋層?

A:因為大腸菌群是需氧及兼性厭氧的,再加一層瓊脂相當于造就一個半厭氧環境,促進兼性厭氧菌的生長,同時抑制其他菌的生長。除此之外,還有防止菌落蔓延的作用,防止遷徙性菌落對菌落計數構成影響。例如一些變形桿菌就會有遷徙現象,從而導致菌落長成一片無法區分。在表面多覆蓋一層培養基就可以避免這種情況的發生。



2GB 4789.3-2016平板法驗證菌落如何挑取?

A:分別計數平板上出現的典型和可疑大腸菌群菌落數。按比例挑取10個不同類型的典型和可疑菌落,少于10個菌落的挑取全部典型和可疑菌落。假如在1:10的平板上可疑大腸菌群有10個,典型大腸菌群有6個。證實實驗應該按照可疑跟典型5:3的比例進行挑取,移種于BGLB肉湯管內。

 

 

結果處理

 

 

按標準里的詳細規定對大腸菌群進行計數。

注意:對于結果檢出的平板或試管需要經過無害化處理(121℃滅菌30分鐘)方能棄去,防止對環境造成污染。

 信息來源:食品微生物檢測  公眾號

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